“好，“杨平点头，“韦伯教授负责体外验证，伊娃负责闭环传感器升级，莉娜负责数据分析模型，汉斯负责病毒载体和光纤製备。唐顺，你协调所有资源，確保一周內出结果。“
“明白！“
体外验证开始。
韦伯亲自主刀，从m7的脊髓损伤区取了一小块组织，大约两立方毫米，放在冰冷的人工脑脊液中，切成了三百微米厚的薄片。这些薄片被转移到培养皿中，保持存活状態，可以持续记录电生理活动四到六个小时。
病毒载体是aav9-hsyn-nphr-eyfp，一种经过改造的腺相关病毒。aav9对神经元有高度的嗜性，hsyn启动子確保nphr只在神经元中表达，eyfp作为萤光標记，方便在显微镜下观察转染效率。
韦伯把病毒溶液滴在脊髓切片上，孵育两个小时。然后用pbs冲洗三遍，放在共聚焦显微镜下观察。
“转染效率，“他调整著焦距，“大约百分之三十五。“
“百分之三十五，“曼因斯坦在旁边记录，“够吗？“
“理论上，脊髓背角的抑制性中间神经元占总神经元数量的百分之二十到三十。百分之三十五的转染效率，意味著大部分抑制性神经元都能被靶向，足够了。“
下一步是电生理验证，韦伯把一片转染过的脊髓切片放到电生理记录槽中，用玻璃微电极记录背角神经元的自发放电。同时，他在切片的上方放置了一根直径两百微米的光纤，连接到一台黄色雷射器上。
“基线放电频率，“他看著示波器，“每秒五赫兹，正常范围。“
然后他打开了雷射器。一束微弱的黄光透过光纤，照射在脊髓切片的表面。
“光强，一毫瓦每平方毫米，波长，五百九十纳米。“
示波器上的波形变了，自发放电频率从每秒五赫兹降到了每秒一赫兹，降幅百分之八十。
“抑制效果確认，“韦伯的声音很平静，但曼因斯坦注意到他的手微微颤抖，“nphr被激活后，氯离子內流，神经元超极化，放电减少。“
“可逆吗？“杨平问。
韦伯关掉雷射器，十秒钟后，放电频率恢復到每秒四点八赫兹。
“完全可逆。“
会议室里爆发出一阵压抑的欢呼。唐顺和汉斯击了一下掌，莉娜在笔记本上飞快地敲著字，伊娃难得地露出了一丝微笑。
但韦伯没有笑，他盯著那片脊髓切片，看了很久，然后说：“这只是体外，体內的环境复杂得多，炎症、免疫反应、胶质瘢痕、血流变化。体外成功，不代表体內能成功。“
“我知道，“杨平说，“但我们至少证明了，这个方向是对的，科研就是摸著石头过河。“
“摸著石头过河？”
韦伯捉摸著这句话，他讚嘆：
“这是富有哲理的一句话。”
紧接著，体內实验也开始进行。
这一次，手术的规模比前两次都大。杨平主刀，曼因斯坦协助，伊娃负责电生理监测，汉斯负责病毒注射和光纤植入，韦伯在台下观摩。
手术的第一步，是病毒注射。汉斯用一根玻璃微注射针，把五微升aav9-hsyn-nphr-eyfp溶液缓慢地注入m7的脊髓背角，双侧，每个注射点一微升，共十个注射点。注射的速度极慢，每分钟零点一微升，以避免压力损伤。
“病毒注射完成，“汉斯匯报，“等待十五分钟，让病毒扩散。“
十五分钟后，第二步，光纤植入。伊娃设计了一套微型光纤阵列，四根光纤，直径各两百微米，排列成一个菱形，覆盖脊髓背角的主要区域。光纤的末端连接到一个皮下植入的led模块上，模块由无线充电供电，可以通过外部控制器调节光强和频率。
“光纤植入完成，“杨平说，“闭合切口。“
手术持续了一个多小时。当m7从麻醉中醒来时，它的后肢肌力没有变化，病毒和光纤本身不会影响运动功能。但所有人都知道，真正的考验还没有开始。
nphr的表达需要时间。病毒进入神经元后，需要三到五天才能表达出足够的蛋白。所以术后第五周的前半周，是等待期。
等待的日子里，研究所的气氛紧张得像一根绷紧的弦。每天早上，伊娃都会给m7做电生理监测，记录脊髓背角的自发放电频率。前三天，数据没有明显变化，nphr还没有表达足够。
第四天，变化出现了。
m7的背角自发放电频率从正常的每秒三到五赫兹，突然升到了每秒十二赫兹。这是一个危险的信號，异常高频放电，意味著中枢敏化正在形成。
“启动光刺激，“韦伯说。
伊娃按下了控制器的按钮，黄色的光通过光纤，照进m7的脊髓背角。
十秒钟后，放电频率降到了每秒六赫兹。二十秒后，降到了每秒四赫兹。一分钟后，稳定在每秒三点五赫兹，比基线还低，说明抑制效果良好。
“有效，“韦伯的声音传来，带著一丝颤抖，“光遗传学闭环调控，有效。“
杨平长长地出了一口气，他看著控制器上那个小小的黄色指示灯，觉得那是我见过的最美的光。
其实科研就是这样，摸著石头过河，谁也不知道结果怎么样，只能边走边调整，慢慢地就走通一条路。如果没有大胆的开始，无论如何也不会有正確的路。
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